کلستر شوی منظم لنډ پیلینډرومیک تکرارونه (CRISPR) د دریم نسل جینوم ایډیټ کولو تخنیک دی چې د خپلو لوړ-تروپټ پایلو سره یې نړۍ کې انقلاب راوستی دی. دا د مختلفو بیولوژیکي ناروغیو او انتاناتو درملنې لپاره کارول شوی. مختلف باکتریاوې او نور پروکاریوټونه (لکه آرکیا) هم د فیزونو په وړاندې د دفاع لپاره CRISPR/Cas9 سیسټمونه لري. راپور ورکړل شوی چې د CRISPR/Cas9 پر بنسټ ستراتیژۍ کولی شي د احتمالي بدل شوي مقاومت جینونو، لیږد، او ایپی جینیټیک تنظیم په نښه کولو سره د درې ګوني منفي سینې سرطان (TNBC) وده او پرمختګ مخه ونیسي. دا معالجوي مداخلې ممکن د ننګونو ستونزو لکه د مخدره توکو مقاومت په حل کې مرسته وکړي چې حتی په TNBC کې لیدل کیږي. اوس مهال، د حجرو په نښه کولو لپاره د CRISPR/Cas9 رسولو لپاره مختلف میتودونه کارول کیږي، لکه فزیکي (مایکرو انجیکشن، الیکټروپوریشن او هایدروډینامیک حالتونه)، ویروس (اډینو سره تړلی ویروس او لینټی ویروس) او غیر ویروس (لیپوزومونه او لیپید نانو پارټیکلونه) - ذرات). که څه هم د TNBC د مالیکولي لاملونو د مطالعې لپاره مختلف ماډلونه رامینځته شوي، د جینوم ایډیټ کولو وسیلو د وړاندې کولو لپاره د حساسو او هدفمند میتودونو نشتوالی د دوی کلینیکي غوښتنلیک محدودوي. په لنډه توګه، دا بیاکتنه په جامع ډول د موجوده شواهدو پراساس د TNBC لپاره د CRISPR/Cas9 درملنې پرمختګ، ننګونې، محدودیتونه او امکانات معاینه کوي. موږ دا هم روښانه کوو چې څنګه د مصنوعي استخباراتو او ماشین زده کړې ترکیب کولی شي د TNBC په درملنه کې د CRISPR/Cas9 ستراتیژیو ته وده ورکړي.
سرطان د حجرو د غیر کنټرول شوي ویش، د حجرو د دورې د چک نقطو د ګډوډۍ، او د تومور د فشارولو جینونو (TSGs) کې د بدلونونو لخوا مشخص کیږي (متیوز او نور، 2022). د سرطان د مختلفو ډولونو په منځ کې، د سینې سرطان په ښځو کې د سرطان ترټولو عام ډول دی او په ټوله نړۍ کې د مړینې لوړه کچه لري (واکس او وینر، 2019). د سینې سرطان یو متفاوت ناروغي ده چې متنوع ځانګړتیاوې لري، لکه هسټولوژیکي او بیولوژیکي ځانګړتیاوې، کلینیکي پریزنټیشن او چلند، او درملنې ته ځواب (ویګلټ او نور، 2010). د سینې سرطان طبقه بندي د سینې سرطان تشخیص او د تومور تشخیص لپاره دقیق بصیرت چمتو کوي. د عام بایومارکرونو او کلینیکوپیتولوژیکي ځانګړتیاو کارول د سینې سرطان طبقه بندي لپاره اصلي معیار دی (تسنګ او تس، 2019). د سینې سرطان د درملنې لپاره تشخیص او غبرګون د ډیری فکتورونو لخوا اغیزمن کیږي، پشمول د اسټروجن ریسیپټر (ER)، پروګیسټرون ریسیپټر (PR)، د انسان د ایپیډرمل ودې فکتور ریسیپټر 2 (HER2/neu)، او هسټولوژیکي درجه، د تومور ډول، او درجه. د سینې سرطان اندازه او د لمف نوډ میټاسټاسیس (التوبیتي، ۲۰۲۰). د سینې سرطان پنځه داخلي مالیکولي فرعي ډولونه پیژندل شوي، په شمول د لومینل A، لومینل B، HER2-enriched، بیسال په څیر، او کلاډین-لو (پرات او نور، ۲۰۱۵). TNBC د سرطان یو مالیکولي فرعي ډول دی چې ټول ER، PR، او HER2 نه څرګندوي (ین او نور، ۲۰۲۰). دا رنځپوهنې ځانګړتیاوې د TNBC سره تړاو لري، د سینې سرطان د بل هر ډول په پرتله د هغې چټک پرمختګ او ډیر تیریدونکی طبیعت تاییدوي (فینګ او نور، ۲۰۱۸). سربیره پردې، پیرو او نور (۲۰۰۰) د سینې سرطان بیا طبقه بندي کولو او د سینې سرطان پنځه داخلي فرعي ډولونه پیژندلو لپاره د مایکرو اری ټیکنالوژۍ څخه کار اخیستی (کاډیناس، ۲۰۱۲). د بیسال په څیر د سینې سرطان د سینې سرطان یو فرعي ډول دی چې درې ګونی منفي فینوټایپ لري او د چټک پرمختګ سره تړاو لري. دا باید په پام کې ونیول شي چې د سینې د سرطان ټول ډولونه معمولا د TNBC په توګه غلط تشخیص کیږي، مګر یوازې 77٪ TNBC دي؛ په برعکس، د TNBC 71-91٪ د بیسال په څیر دي، چې دا په ګوته کوي چې د سینې سرطان دا دوه ډولونه سره یوځای کیږي او مختلف طبقه بندي استازیتوب کوي (وانګ ډي.-یي او نور، 2019). دا د TNBC د متفاوت ځانګړتیا ته اړتیا رامینځته کوي ترڅو د تشخیص روښانه کړي او اوسني او راتلونکي درملنې ته احتمالي ځوابونه وپیژني. سربیره پردې، TNBC د ټولو سینې د سرطان قضیو 15-20٪ جوړوي او د 50 کلونو څخه کم عمر لرونکو میرمنو کې ډیر عام دی. د TNBC نږدې 20٪ قضیو کې BRCA1 یا BRCA2 بدلونونه راپور شوي (Xie او نور، 2017؛ Tzikas او نور، 2017). ، 2020). مطالعاتو دا هم ښودلې چې TNBC یو ځانګړی معافیتي مایکرو چاپیریال لري چې پکې د رګونو د انډوتیلیل ودې فکتورونو لوړه کچه، د تومور سره تړلي میکروفیجونه (TAMs)، د تومور نفوذ کونکي لیمفوسایټس (TILs)، او نور مالیکولونه شامل دي چې د تومور وده او مهاجرت کې ښکیل دي. له همدې امله، د TNBC مایکرو چاپیریال پوهیدل د هغې د تشخیص او درملنې لپاره خورا مهم دي (فین او هی، 2022).
د TNBC د تشخیص ارزولو او د اغیزمنې درملنې ډاډ ترلاسه کولو لپاره، دقیق تشخیص، چې په عمده توګه د ER، PR او HER2 کشف کولو لپاره د امیونوهیسټو کیمیا (IHC) پر بنسټ والړ دی، او د سینې نیوپلاسمونو کشف کولو لپاره میموګرافي، مهمه ده. په هرصورت، میموګرافي نشي کولی د انټراټومورال ځانګړتیاوې لکه نیکروسس او فایبروسس په مناسب ډول انځور کړي (دیپک سینګ او نور، 2021). څرنګه چې ضعیف تشخیص او تشخیص ډاکټران د سم درملو لیکلو مخه نیسي (چوهدري، 2020)، د TNBC ناروغانو لپاره د پاملرنې ښه کولو لپاره مختلف ستراتیژۍ کارول کیږي. اوس مهال، دوه درمل، ډاکسوروبیسین او سایکلوفاسفامایډ، د TNBC ناروغانو کې کارول کیږي او ښې پایلې یې ښودلې دي. سربیره پردې، نور پلاټینیم درمل کارول کیږي، لکه کاربوپلاټین او سیسپلاټین (سیکوف او نور، 2015). برسېره پردې، د PARP مخنیوی کونکي لکه Olaparib، Velaparib، او PF-01367338 د TNBC درملنې لپاره د احتمالي کیموتراپي درملو په توګه کارول شوي دي (Ishino et al., 2018). څرنګه چې د Wnt/b-Catenin، NOTCH، او Hedgehog سیګنالینګ لارې د TNBC په رامینځته کیدو او پرمختګ کې دخیل دي، نو د دې لارو لپاره د درملو په نښه کول ممکن یوه مهمه ستراتیژي وي (Aysola et al., 2013). که څه هم جراحي، وړانګې درملنه او کیموتراپي نن ورځ د TNBC لپاره د درملنې اصلي اساس پاتې دی، د نوي درملنې په پراختیا کې د پام وړ پرمختګ شوی دی پشمول د هدف شوي درملنې، معافیت درملنه، د CRISPR پورې اړوند د جین ایډیټ کولو مختلف وسایل لکه Cas9n، dCas9. ، CRISPR/Cas12، پرائم ایډیټ کول، او CRISPR/Cas9-هدف شوي جین درملنه. دلته به موږ د TNBC په درملنه کې کارول شوي د CRISPR پورې اړوند د جین ایډیټ کولو مختلفو وسیلو باندې تمرکز وکړو. د دوی په منځ کې، CRISPR/Cas9 پراخه پاملرنه ترلاسه کړې.
Cas9n، چې د Cas9 نیکیس په نوم هم پیژندل کیږي، د Cas9 پروټین یو جینیاتی پلوه انجینر شوی ډول دی چې د CRISPR/Cas9 جینوم ایډیټ کولو سیسټم څخه اخیستل شوی (ګوپتا او نور، 2019). په خپل اصلي بڼه کې، Cas9 پروټین دوه نیوکلیز ډومینونه لري: RuvC او HNH، چې اصلي دنده یې د دواړو DNA تارونو ویشل دي. په هرصورت، په Cas9n کې، د نیوکلیز ډومینونو څخه یو، HNH، په جینیاتی ډول بدل شوی او غیر فعال کیږي. له همدې امله، د Cas9n HNH ډومین غیر فعال پاتې کیږي. یوازې RuvC ډومین فعال پاتې کیږي، چې Cas9n ته اجازه ورکوي چې په واحد DNA تارونو کې ماتونه پرې کړي یا رامینځته کړي (ټریوینو او ژانګ، 2014). د Cas9 سره پرتله کول، Cas9n کولی شي په مؤثره توګه د هدف څخه بهر اغیزې کمې کړي او په سمه توګه د حجرو ترمیم میکانیزمونه ښه کړي. Cas9n د مختلفو ستونزو حل کولو لپاره کارول کیدی شي، لکه په دوه ګوني DNA کې په ځانګړو ځایونو کې د ماتونو رامینځته کول. د دې هدف لپاره، دوه Cas9n مالیکولونه یوځای او یوځای کارول شوي (Yee، 2016). مخلوط نسب کایناز ۳ (MLK3) یو مایټوجن فعال پروټین کایناز دی چې د TNBC میټاسټاسیس په جریان کې د کلیدي تنظیم کونکي په توګه کار کوي (کرونان او نور، ۲۰۱۲).
MLK3 کولی شي د TNBC میټاسټاسیس ته د رسیدو لپاره ډیری سیګنلینګ لارې فعالې کړي. د مثال په توګه، د c-Jun N-terminal kinase (JNK) لاره د حجرو حرکت او د حجروي میټریکس تخریب تنظیموي، او MLK3 د JNK لاره فعالوي، په دې توګه د حجرو حرکت زیاتوي او برید کونکي ملکیتونه ورکوي (Rattanasinchai and Gallo, 2016). MLK3 د EMT هم تنظیموي. د دې کولو لپاره، دا د ښکته جریان لیږد عوامل لکه Snail، Slug او Twist فعالوي. دا عوامل د اپیتیلیل مارکرونو څرګندونه منع کوي او د mesenchymal مارکرونو څرګندونه هڅوي، چې د میټاسټیټیک فینوټایپ ترلاسه کولو لامل کیږي (Casalino et al., 2023). MLK3 لیدل شوی چې د ECM بیا رغونه او د پروټیزونو فعالولو کې رول لوبوي لکه میټریکس میټالوپروټینیز (MMPs) چې ECM تخریبوي. دا د تومور حجرو یرغل اسانه کوي او لرې ځایونو ته خپریږي (Katari et al., 2019). په دې توګه، پخوانیو مطالعاتو ښودلې چې MLK3 په TNBC کې مهم رول لوبوي. رتناسینچای او ګالو د MLK3 رول مطالعه کولو لپاره د TNBC ماډلونه وکارول او وموندله چې دا د ځانګړو سیګنالینګ لارو له لارې د سرطان پراختیا هڅوي. دوی د MLK3 د سمولو لپاره CRISPR/Cas9n وکارول او د TNBC میټاسټاسیس کې یې د پام وړ کمښت ولیدل (رتناسینچای او ګالو، 2016).
dCas9، چې ډیری وخت غیر فعال Cas9 بلل کیږي، د Cas9 پروټین یوه تعدیل شوې مشتق بڼه ده. د فعال Cas9 برعکس، dCas9 د انډونیوکلیز فعالیت نلري، چې دا د DNA دوه ګونی سټرینډ ماتولو توان نلري. له همدې امله، dCas9 د DNA ترتیب کې د کوم بدلون یا تعدیل پرته د جینوم ځانګړي سیمې په دقیق ډول په نښه کولو لپاره کارول کیدی شي (وانګ او نور، 2016). په dCas9 کې، دوه انډونیوکلیز پروټینونه، RuvC او HNH، د مهمو امینو اسید پاتې شونو د فشارولو له لارې غیر فعال کیږي. (ریکټر او نور، 2016). د DNA د تخریب فعالیت نشتوالي سره سره، dCas9 په جینیاتي څیړنه او بایو ټیکنالوژۍ کې یو شمیر مهم رول لوبوي. د مثال په توګه، دا د جینوم د ځانګړو سیمو لید ته اجازه ورکوي، د ټرانسکرپشن تنظیم اسانه کوي، او ایپی جینیاتي تعدیلاتو ته وده ورکوي (بروکن او نور، 2018).
د ټرانسکرپشن فکتور ZEB1 (د زنک فنګر ای بکس بانډینګ هومیو باکس 1) د اپیتیلیل-میسینچیمل لیږد (EMT) په منځګړیتوب کې یو ځانګړی او مهم رول لوبوي، یوه حجروي پروسه چې د جنین پراختیا، نسج ترمیم، او د سرطان پرمختګ په جریان کې پیښیږي. دا د اپیتیلیل حجرو بدلون په میسینچیمل حجرو کې شاملوي، چې په پایله کې د حجرو مورفولوژي، حرکت، برید، او داسې نورو کې بدلونونه راځي. (وو او نور، 2020). ZEB1 د ډیری اپیتیلیل مارکرونو مخه نیسي، لکه E-cadherin او Occludin، کوم چې په TNBC کې د اپیتیلیل حجرو د حجرو-حجرو چپکولو او قطبي ساتلو مسؤلیت لري (مورینو-بوینو او نور، 2008). سربیره پردې، ZEB1 ځینې مارکرونه فعالوي لکه N-cadherin، ویمینټین او فایبرونیکټین (کونراډي او نور، 2014) او همدارنګه د سایټوسکلیټل بیا جوړونې کې ښکیل جینونه تنظیموي لکه Rho GTPases او میټریکس میټالوپروټینیز (MMPs) (هوانګ). او نور، ۲۰۱۴). ۲۰۲۲)، سربیره پردې، دا د مختلفو سیګنال کولو لارو لکه د ودې فکتور-β (TGF-β)، Wnt سیګنال کولو، او نورو باندې هم اغیزه کوي، په دې توګه په TNBC کې د تومور یرغل او میټاسټاسیس ته وده ورکوي (چن او نور، ۲۰۱۶). ډیری مطالعات او ساینسي شواهد ښیي چې ZEB1 د TNBC د کشف او درملنې مداخلې لپاره د ارزښتناکه اجنټ په توګه لوی ظرفیت لري. په یوه وروستي څیړنه کې، واریه او نورو د TNBC ماډل کارولی او د dCas9 لخوا د ZEB1 بشپړ فشار ترلاسه کړی. په دې توګه، دوی په ان ویوو شرایطو کې د ZEB1 خورا لوړ ځانګړتیا او نږدې بشپړ مخنیوی لیدلی (واریه او نور، ۲۰۲۳).
CRISPR/Cas12 د جین ایډیټ کولو یوه وسیله ده چې CRISPR/Cpf1 نومیږي. دا د CRISPR/Cas سیسټم څخه اخیستل شوی، چیرې چې د Cas12 اصطلاح د CRISPR سره تړلي پروټین 12 ته اشاره کوي (Bharatkumar et al., 2022)، کوم چې په بشپړ ډول Cas9 ته ورته دی. یوازینی توپیر دا دی چې دا د Cas12 پروټین لري. د Cas9 په پرتله، Cas12 ځینې ځانګړي دندې لري لکه د جین ایډیټ کولو پروسې په جریان کې د چپچینې پایونو رامینځته کول، پداسې حال کې چې Cas9 کندې پایونه رامینځته کوي (Wang et al., 2021). د Cas12 دا ملکیت د دې ځانګړي DNA لاسوهنې ټیکنالوژۍ کې مرسته کوي. د پروټین په توګه چې د هدف DNA په دقیق ډول پیژندلو او پرې کولو وړتیا لري، دا غیر معمولي استعداد لري، چې دا د جین ایډیټ کولو په شمول د مختلفو غوښتنلیکونو لپاره یو اغیزمن وسیله جوړوي (Pickar-Oliver and Gersbach, 2019).
د نورو CRISPR ډولونو په څیر، CRISPR/Cas12 هم په TNBC کې د جینونو د ماتولو یا فعالولو وړتیا لري، هغه جینونه په نښه کوي چې د هغې د رنځجنیسس یا درملنې ته د ځواب ویلو کې مهم رول لوبوي (یانګ او ژانګ، 2023). د دې پروسې د ترسره کولو لپاره، یو لارښود RNA (gRNA) رامینځته شو چې Cas12 د هدف جین ته لارښوونه کوي. یوځل چې Cas12 خپل هدف سره وصل شي، دا په DNA کې دوه ګونی سټرینډ ماتونه معرفي کوي او د DNA ترمیم میکانیزمونه فعالوي. د ترمیم پروسې په جریان کې، غلط نیوکلیوټایډونه شامل کیدی شي، چې د جین بدلون او د فعالیت له لاسه ورکولو لامل کیږي (ژانګ او نور، 2021a). سربیره پردې، د Cas12 انزایم (dCas12 په نوم یادیږي) یوه ښه شوې نسخه هم د جینونو د فعالولو لپاره کارول شوې وه. د ټرانسکرپشن فعالونکي سره یوځای کولو سره، دا ممکنه ده چې ځینې جینونه هڅول شي، په دې توګه دوی فعال کړي. دا ټیکنالوژي د تومور سپپرسر جینونو فعالولو ته وده ورکولو کې لوی ظرفیت لري (سلطان او نور، 2022).
پرائم ایډیټینګ یوه نوې پرمختللې او خورا غوره جینوم ایډیټینګ ټیکنالوژي ده. دا د یو ژوندی موجود DNA په ډیر دقیق ډول د تعدیل کولو وړتیا لري (چن او لیو، ۲۰۲۳). پرائم ایډیټینګ د دوو اصلي برخو د ادغام له لارې ترلاسه کیږي: یو تعدیل شوی CRISPR/Cas9 انزایم او ریورس ټرانسکرپټیس. د CRISPR/Cas9 انزایم رول دا دی چې په جینوم کې دقیق ځایونه په غوره توګه په نښه کړي، پداسې حال کې چې ریورس ټرانسکرپټیس د هدف ځای کې د DNA په بشپړ ډول تعدیل کولو کې مرسته کوي (حسن او نور، ۲۰۲۱). د پرائمر ایډیټینګ میکانیزم کې، لومړی ګام د پرائمر ایډیټینګ لارښود RNA (pegRNA) رامینځته کول شامل دي (Standage-Beier او نور، ۲۰۲۱). دا د هدف ترتیب او RNA ټیمپلیټ لري چې د هدف DNA کې د مطلوب ایډیټینګ سایټ سره مطابقت لري. pegRNA بیا د پرائمر ایډیټینګ نیوکلیز (PE2) سره د هدف حجرو ته معرفي کیږي. PE2 یو فیوژن پروټین دی چې د Cas9 انزایم، ریورس ټرانسکرپټیس، او د پرائمر ایډیټینګ اډاپټر (مارټین-الونسو او نور، ۲۰۲۱) څخه جوړ دی. د حجرو دننه، pegRNA او PE2 کمپلیکسونه هغه ځانګړي DNA لټوي چې دوی یې تعدیل کول غواړي. Cas9 انزایم DNA پرې کوي او یو ټیمپلیټ جوړوي چې د واحد تارونو څخه جوړ وي (Choi et al., 2022). ریورس ټرانسکرپټیس دا ټیمپلیټ د DNA د ترمیم لپاره چمتو کولو لپاره کاروي. د DNA کاپي کولو سره سره، د RNA ټیمپلیټ د ترمیم لپاره لارښوونې هم شاملې دي. په پای کې، نوی جوړ شوی DNA سټرینډ د DNA کې د ماتیدو ترمیم لپاره د ټیمپلیټ په توګه کارول کیږي، چې په پایله کې د DNA بدل شوی ترتیب رامینځته کیږي چې مطلوب تعدیل لري (Ochoa-Sanchez et al., 2021). د پرائمر ایډیټ کولو میکانیزمونه کولی شي په جینونو کې پراخه بدلونونه رامینځته کړي. دا کولی شي د نقطې بدلونونه، داخلول، حذف کول، او حتی د جین ځای په ځای کول په نښه کړي (Anzalone et al., 2019; Chen and Liu, 2023). پرائم ایډیټ کول د پخوانیو جینوم ایډیټ کولو ټیکنالوژیو په پرتله ډیری ګټې وړاندې کوي. پدې کې دقت زیاتول، د هدف څخه بهر اغیزې کمول، او د DNA دوه ګونی تار ماتولو باندې تکیه کولو پرته د DNA ایډیټ کولو وړتیا شامله ده (Anzalone et al., 2020).
د CRISPR/Cas9 ټیکنالوژي په اصل کې د پلازمیډ لیږد او فیج انتان څخه د باکتریا د ساتنې لپاره رامینځته شوې وه او وروسته د جینوم ترمیم لپاره د RNA پر بنسټ د DNA د هدف کولو د یوې اغیزمنې وسیلې په توګه بیا کارول شوې وه (جیانګ او ډوډنا، ۲۰۱۷). سربیره پردې، د CRISPR/Cas9 سیسټم په ترتیب سره د باکتریا او لرغوني جینومونو په ۵۰٪ او ۸۷٪ کې شتون لري (ایشینو او نور، ۲۰۱۸). CRISPR/Cas9 د ان ویوو او ان ویټرو حالتونو په کارولو سره د هر ډول غیر معمولي جینیاتي ترتیب د حذف کولو، داخلولو او اصلاح کولو لپاره یو احتمالي وسیله ده (سابیت او نور، ۲۰۲۱). سربیره پردې، CRISPR/Cas9 د انټیجیوټ معافیت سیسټم برخه ښودل شوې ځکه چې د ګټو د هدف جینونو لپاره د هغې ځانګړتیا ده (چن او ژانګ، ۲۰۱۸).
CRISPR/Cas9 د Cas9 او یو واحد لارښود RNA (sgRNA) څخه جوړ دی. Cas9 یو انډونیوکلیز دی چې د ډیری پروټین اجزاو څخه جوړ شوی دی. سربیره پردې، Cas9 ځانګړي ساختماني او جوړښتي ځانګړتیاوې لري (Pacesa et al., 2022) ځکه چې دا دوه لوبونه لري: پیژندنه (REC) او نیوکلیز (NUC). REC لوب نور په دریو سیمو ویشل شوی: REC1، REC2، او د پل هیلیسونه (کروم ویل et al., 2018). NUC د دریو لوبونو څخه جوړ دی، چې نوم یې RuvC (RuvC I، RuvC II، RuvC III)، HNH او د پروټوسپیسر نږدې شکل (PAM) تعامل ډومین (انځور 1) (سنګ et al., 2016). sgRNA دوه برخې لري، پشمول د CRISPR RNA (crRNA) او د کوچني RNA (ټریسر RNA) ټرانسکوډ کول (شکل 1). sgRNA د Cas9 پروټین د کنیکسین سره نښلوي ترڅو یو فعال کمپلیکس جوړ کړي، چې د انفیکټر کمپلیکس په نوم هم پیژندل کیږي (ریکټر او نور، 2012). crRNA د 18-20 نیوکلیوټایډ اساس جوړه ده چې د هدف DNA ترتیبونو پیژندلو کې مهم رول لوبوي. سربیره پردې، crRNA د هدف DNA سره جوړه کوي، او tracrRNA د Cas9 نیوکلیاز لپاره د سکیفولډ په توګه کار کوي ترڅو هدف DNA وصل کړي (منګهوار او نور، 2019). له بلې خوا، د PAM ترتیب 3 نیوکلیوز لري، کوم چې د انفیکټر کمپلیکس د DNA سره تړل تاییدوي، مشخص کوي او منځګړیتوب کوي. د Cas9 پروټین کمپلیکس فرعي واحدونه RuvC او HNH کتلټیک فعالیت لري (ریکټر او نور، 2012؛ اسماماو او زوډي، 2021). د Cas9 فرعي واحد د HNH نیوکلیاز ډومین د crRNA سره تړلی DNA سټرینډ ماتوي. د RuvC نیوکلیز ډومین د DNA نور تارونه ماتوي او دوه ګونی تارونه ماتوي (DSBs)، چې وروسته د DNA ماتولو ترمیم دوه مختلف میکانیزمونه فعال کیږي (جیانګ او ډوډنا، ۲۰۱۷) (شکل ۱).
شکل ۱. د CRISPR/Cas9 (A) عمومي کتنه. د CRISPR/Cas9 سیسټم اجزا: (i). Cas9 انډونیوکلیز د هدف DNA ترتیب پرې کولو مسؤلیت لري، (ii) یو واحد لارښود (sg) RNA چې د crRNA او tra-crRNA chimeras د فیوژن څخه رامینځته کیږي. (دوه). Cas9 ډیری برخې لري لکه Rec I، Rec II، NUC لوب (HNH او Ruv C فرعي برخې دي) او PAM تعامل ډومین (C) د اړوندو دندو سره. د CRISPR/Cas9 پروټین کمپلیکس د DNA ترتیبونه په غیر تکمیلي او تکمیلي بڼو (D) ویشلي. CRISPR/Cas9 جینوم په دریو مرحلو کې ایډیټ کوي: پیژندنه، پرې کول او ترمیم. ډیزاین شوی sg-RNA Cas9 ته لارښوونه کوي او د تکمیلي برخې crRNA له لارې مطلوب ترتیب پیژني. Cas9 په 5′-NGG-3′ کې د PAM ترتیب پیژني او DNA خوري، د DNA-RNA هایبرډ جوړوي او درز فعالوي. د Cas9 د HNH ډومین تکمیلي سټرینډ ماتوي، او RuvC ډومین غیر تکمیلي سټرینډ ماتوي. CRISPR/Cas9 د dsDNA ترمیم په دوه لارو ماتولو سره کوي: غیر همجنسي پای یوځای کیدل (NHEJ) او هومولوژي لارښود ترمیم (HDR). NHEJ د انزایمیک پروسې له لارې د بهرني همجنسي DNA په نشتوالي کې دوه ګونی سټریډ شوی DNA ترمیموي، یو د غلطۍ احتمال میکانیزم چې کولی شي تصادفي DNA ترتیبونه داخل کړي یا لرې کړي. HDR خورا مشخص دی او همجنسي DNA ټیمپلیټونو ته اړتیا لري.
د CRISPR/Cas9-منځګړیتوب ترمیم لارې کې غیر همجنسي پای یوځای کیدل (NHEJ) او هومولوژي-لارښود ترمیم (HDR) میکانیزمونه شامل دي. NHEJ د غلطۍ خطر لرونکې لاره ده ځکه چې دا داخلول یا حذف کول پکې شامل دي او د ترمیم میکانیزم په جریان کې هیڅ نمونې ته اړتیا نلري. دا د معیاري پروټینونو تولید لپاره تصادفي نیوکلیوټایډونه کاروي (عباسي او نور، 2021). دا ترمیم سیسټم څلور کمپلیکسونه لري لکه KU کمپلیکس، د کراس بشپړونکي پروټین کمپلیکس ډول 4 (XRCC-4)، د DNA پای پروسس کولو انزایم، او د پروټین کایناز DNA-PKcs (عباسي او نور، 2021). د KU کمپلیکس پروټین دوه فرعي واحدونه لري، Ku 70 او Ku 80، او د NHEJ میکانیزم کې مهم رول لوبوي، ځکه چې د ترمیم میکانیزم د هدف DNA د کنده یا نږدې کنده پایونو سره د دوه فرعي واحدونو (Ku 70 او Ku 80) د تړلو له لارې پیل کیږي (عباسي او نور، 2021)، د ټپي کیدو ځای ته د NHEJ پورې اړوند نور عوامل ګمارلو لپاره د سکیفولډ په توګه کار کوي (یانګ او نور، 2020). XRCC-4 او DNA لیګیز په ترتیب سره د 334 او 911 امینو اسیدونو څخه جوړ شوي دي، او د XRCC4-DNA لیګیز IV کمپلیکس د DNA پایونو تړل هڅوي (چټرجي او نور، 2015). د DNA پای پروسس کولو انزایم، چې د پولی نیوکلیوټایډ کایناس 3′-فاسفیټ په نوم هم پیژندل کیږي، د DNA پای پروسس کولو انزایم دی. دا کولی شي په DNA کې 3′P ګروپ لرې کړي او د DSB ترمیم پرمهال 5′OH ګروپ فاسفوریلیټ کړي. پدې کې د SSB ترمیم لارې په کارولو سره د واحد سټرینډ ماتونو (SSBs) ترمیم هم شامل دی (چټرجي او نور، 2015). د پروټین کایناز DNA-PKcs د DNA پورې تړلی پروټین کایناز دی چې د PIKKs (فاسفیټایډلینوسیتول 3-کیناز پورې اړوند کایناز) او اټکسیا ټیلانګیکټاسیا میوټیډ (ATM) کورنۍ، او همدارنګه د ATM او Rad3 پورې اړوند ATRs د کتلټیک فرعي واحد څخه جوړ دی. سټرینډ ماتونه (DSBs) او واحد سټرینډ ماتونه (یو او نور، 2020؛ پینګ او نور، 2016).
HDR یو ډیر دقیق او مناسب ترمیم میکانیزم دی ځکه چې معلومات د همجنس DNA ډوپلیکس د سالم شکل په کارولو سره کاپي کیږي، که څه هم دا د خور کروماتیدونو شتون ته اړتیا لري. دا د تی لرونکو حجرو دورې د S/G2 مرحلې په جریان کې پیښیږي. HDR په عمده توګه د خمیر ډولونو کې پیښیږي، مګر NHEJ په تی لرونکو حیواناتو کې مهم دی (برما او نور، 2006؛ عباسي او نور، 2021). د بشپړ ترمیم میکانیزم په 1 شکل کې ښودل شوی.
څرنګه چې TNBC د جینیاتي او ایپی جینیټیک غیرمعمولیتونو له امله رامینځته کیږي، د CRISPR/Cas9 په کارولو سره د وژونکي جینومیک/ایپی جینومیک غیرمعمولیتونو اصلاح ممکن د درملنې یوه معقوله لاره وي (چن او نور، ۲۰۱۹). سربیره پردې، ځینې ټرانسکرپشن فکتورونه چې د حجرو ځانګړي ټرانسکرپشن تنظیم کې ښکیل دي ممکن د سرطان حجرو ځانګړي ځانګړتیاوې وښيي، دا وړاندیز کوي چې ټرانسکرپشن تنظیم ممکن د سرطان درملنې لپاره غوره لاره وي (ډروسټ او نور، ۲۰۱۷). د درملو پراختیا لپاره د تومورونو د دې مالیکولي ځانګړتیاو لکه جینیاتي، ایپی جینیټیک او ټرانسکرپشن نیمګړتیاو څخه ګټه پورته کول کولی شي کلینیکي پایلې ښه کړي او د سکرینینګ لګښتونه کم کړي. CRISPR د جین ایډیټ کولو احتمالي وسیله ده چې نه یوازې د سرطان لامل کیدونکي جینومیک اهداف کشف او پیژندلی شي، بلکه د انسان په حجرو کې د آنکوجینونو د ترمیم، فشار او ایپی جینیټیکي تعدیل لپاره هم کارول کیدی شي (جدول ۱) (احمد او نور، ۲۰۲۱). د تومور سپپرسرانو، آنکوجینونو، او د مخدره توکو مقاومت سره تړلي جینونو د لیدلو لپاره د CRISPR ډیری سکرینونه ترسره شوي. د مختلفو TNBC آنکوجینونو د سمولو لپاره د CRISPR/Cas9 کارول په شکل 2 کې ښودل شوي.
شکل ۲. د CRISPR/Cas9 په کارولو سره د مختلفو TNBC آنکوجینونو جین ترمیم کول چې د تومور وده او میټاسټاسیس کموي. پدې آنکوجینونو کې CDK7، NAT1، UBR5، YTHDF2، ITGA9، CXCR4 او CXCR7، Crypto1، ROR1 او ST8SIA شامل دي، کوم چې د TNBC په پیښیدو او میټاسټاسیس کې ښکیل دي.
د سرطان حجرو مهاجرت، یرغل، او اپیتیلیل-میسینچیمل لیږد (EMT) د ITGA9 سره تړاو لري. پخوانیو مطالعاتو ښودلې چې ITGA9 د نوچ لارې کې یو مهم لوبغاړی دی او د رابډومیوسارکوما میټاسټاسیس کې په زړه پورې رول لوبوي (مولیسټ او نور، 2020). سربیره پردې، ITGA9 د تومور په څو ډولونو کې د ناروغانو تشخیص سره نږدې تړاو لري، پشمول د سینې سرطان (وانګ زی. او نور، 2019). سربیره پردې، د ITGA9 بایو انفارمیټکس تحلیل ښودلې چې په TNBC کې د هغې څرګندونه د نورو سینې سرطان فرعي ډولونو په پرتله د پام وړ لوړه وه. د ITGA9 لوړه کچه د TNBC ناروغانو کې د تومور میټاسټاسیس او بیا راګرځیدو سره تړاو لري. د CRISPR/Cas9 لخوا د ITGA9 ناک آوټ د سرطان سټیم سیل (CSC) په څیر ملکیتونو، د تومور انجیوجینیسیس، د تومور وده، او د TNBC کې د β-کیټینین تخریب هڅولو سره د میټاسټاسیس کمولو پایله درلوده (وانګ زی. او نور، 2019).
کریپټو-۱ د TGF-β کورنۍ غړی دی او د لومړني جنین پیدایښت، د سټیم حجرو ساتنې، او د سرطان میټاسټاسیس لپاره خورا مهم دی (ایشي او نور، ۲۰۲۱). د Tdgf-۱ په نوم هم پیژندل کیږي، دا یو آنکوجینک GPI-انکر شوی سیګنلینګ پروټین دی چې د لومړني سټریک، میسوډرم او انډوډرم د جوړښت تنظیم کې دخیل دی، او همدارنګه د جنین پیدایښت په جریان کې د بدن د غړو په پراختیا کې د کیڼ/ښي اړخ غیر متناسب جوړښت رامینځته کول (ژانګ او نور، ۲۰۲۱b). برسیره پردې، کریپټو-۱ د سټیم حجرو مارکر په توګه د اپیتیلیل-میسینچیمل لیږد (EMT) کې دخیل ښودل شوی (ژانګ او نور، ۲۰۲۱b). EMT نه یوازې د مختلفو پروسو لکه د جنین پراختیا، فایبروسس او د زخم درملنې لپاره خورا مهم دی، بلکې د سرطان د یرغل او میټاسټاسیس لپاره هم مهم دی. سربیره پردې، کریپټو-۱ ښودل شوی چې د څلورو نوچ ریسیپټرونو سره تعامل کوي او د دوی د ژباړې وروسته پختوالي ته وده ورکوي (برانډسټاډر او میلارډ، ۲۰۱۹). د نوچ سیګنلینګ لاره د انسان د سینې سرطان حجرو په ساتنه کې دخیل پیژندل کیږي. مطالعاتو ښودلې چې د کریپټو-۱ CRISPR/Cas9-منځګړیتوب ناک آوټ د سرطان وده او میټاسټاسیس فشاروي. له همدې امله، کریپټو-۱ ممکن د TNBC لپاره یو مهم معالجوي هدف شي (کاسټرو او نور، ۲۰۱۵).
د XCL12 پروټین او د هغې کیموکین ریسیپټر CXC (CXCR4 او CXCR7) د سرطان حجرو په تکثیر، وده، مهاجرت او یرغل کې مختلف رول لوبوي (وو او نور، 2015). دا کیمو ریسیپټرونه د ان ویوو او ان ویټرو ماډلونو کې د ډیری سیګنلینګ لارو له لارې د TNBC پراختیا سره تړاو لري (وو او نور، 2015). سربیره پردې، د CXCR4 او CXCR7 فعالول په TNBC کې د میټاسټاسیس او ضعیف تشخیص سره تړاو لري (کارن او نور، 2022). له همدې امله، د CXCR4 او CXCR7 ناک آوټ ممکن د سینې سرطان درملنې لپاره د مخدره توکو اغیزمن هدف جینونه شي، په شمول د TNBC. د یانګ او نورو لخوا مطالعه. یانګ او نورو (2019) د CRISPR/Cas9 څخه کار واخیست ترڅو د CXCR4 او CXCR7 جینونه سره یوځای کړي او وموندله چې د TNBC تکثیر، وده، مهاجرت او یرغل د پام وړ مخنیوی شوی (یانګ او نور، 2019).
د سینې سرطان په نسجونو کې د miR-3662، د TNBC آنکوجین، زیاتوالی لیدل شوی (Yi et al.، 2022). د miR-3662 ماتیدل د سینې سرطان د تومور وده او میټاسټاسیس دواړه په ویوو او ان ویټرو کې مخنیوی کوي (اګروال او ګوپتا، 2021). HBP-1 د Wnt/-catenin سیګنالینګ یو قوي مخنیوی کونکی دی او احتمال لري چې د TNBC حجرو د miR-3662-منځګړیتوب ودې لپاره مسؤل وي. پدې وروستیو کې، Yi et al. وموندله چې د miR-3662-HBP1 محور د TNBC حجرو کې د Wnt/-catenin سیګنالینګ لاره تنظیموي (Yi et al.، 2022). د دې د تومور ځانګړي څرګندونې له امله، miR-3662 ممکن د TNBC لپاره احتمالي درملنې هدف وي. په دې توګه، د miR-3662 CRISPR/Cas9-منځګړیتوب ماتیدل ممکن د TNBC درملنې لپاره د نوي درملو رامینځته کولو لپاره غوره لاره وي.
UBR5 یو 300 kDa نیوکلیوفاسفوپروټین دی چې په مختلفو سرطانونو کې د تومورجنیسیس، میټاسټاسیس، او معافیت غبرګون د کلیدي تنظیم کونکي په توګه پیژندل شوی (شیرر او نور، 2015؛ فو او نور، 2023). راپور ورکړل شوی چې UBR5 په TNBC نمونو کې خورا لوړ تنظیم شوی او د خپل ubiquitin ligase فعالیت له لارې د تکثیر هڅولو سره د ERα فعالیت هڅوي (بولټ او نور، 2015). د لومړني TNBC نمونو بشپړ ایکسووم ترتیب مطالعاتو هم د UBR5 زیاتوالی ښودلی، چې د TNBC په پراختیا کې د هغې رول وړاندیز کوي. برسیره پردې، د UBR5 CRISPR/Cas9 لخوا پرمخ وړل شوي حذف کول د TNBC میټاسټاسیس او د تجربوي موږک ماډلونو کې د ودې د پام وړ مخنیوی ښودلی. سربیره پردې، د وحشي ډول موږک ماډل کې د UBR5 شاملول د هغې بشپړ فعالیت بیرته راګرځولی، پداسې حال کې چې دا اغیزه په غیر فعال شوي میوټینټ سټرینونو کې نه وه لیدل شوې (لیاو او نور، 2017). د UBR5 نشتوالی د ضعیف انجیوجینیسیس له امله په TNBC کې د اپوپټوسس زیاتوالي، نیکروسس او د تومور د ودې مخنیوي سره تړاو لري. د UBR5 د ضایع کیدو له امله، لرې پرتو ارګانونو ته د تومور خپریدل کم شوي، او UBR5 په عمده توګه د E-cadherin څرګندونه کمولو سره غیر معمولي EMT هڅوي (ژانګ او وینبرګ، 2018). پدې وروستیو کې، UBR5 د TNBC کې د IFN-γ-induced PDL1 لیږد کې د E3 ubiquitination فعالیت نشتوالي له امله خورا مهم فاکتور ښودل شوی. د RNA ټرانسکرپټوم تحلیل څرګنده کړه چې UBR5 ممکن د IFN-γ لارې سره تړلي جینونو باندې سیسټمیک اغیزې ولري او د پروټین کایناس RNA (PKR) او د هغې د سیګنال ټرانسډوسرونو او فعالونکو د فعالولو کچې لوړولو سره د PDL1 لیږد فعالولو ته وده ورکړي. ټرانسکرپشن 1 (STAT1) او انټرفیرون تنظیمي فاکتور 1 (IRF1). په هرصورت، د UBR5 او PD-L1 څرګندولو CRISPR/Cas9-منځګړیتوب ګډ خلاصول د یوازې د بلاک کولو په پرتله یو همغږي معالجوي اغیز لري، د تومور مایکرو چاپیریال باندې ژور اغیزې لري (وو او نور، 2022). په دې توګه، CRISPR/Cas9 ممکن د UBR5 فعالیت مخنیوي لپاره یو مهم وسیله وي، په دې توګه د TNBC میټاسټاسیس او د تومور وده فشاروي.
ROR1 د I ډول ټرانس میمبرین پروټین دی چې د سرطان او جنیني ودې په جریان کې څرګندیږي او د آنکوفیټل پروټین په توګه پیژندل شوی (نیکولاس بورچرډینګ، 2014). د مختلفو انساني سرطانونو بریدګر چلند د ROR1 د لوړولو سره تړاو لري. د ان ویوو او ان ویټرو مطالعاتو څخه ژمنې پایلې ترلاسه شوي چې د ROR1 په نښه کولو معالجوي مرکبات پکې شامل دي (چیان او نور، 2016). د سینې نسج بایوپسي کې د ROR1 mRNA لوړه کچه د تیریدونکي بیسال په څیر سینې (BL) تومورونو او د بدن نورو برخو ته د دوی مهاجرت سره هم تړاو لري. سربیره پردې، د ROR1 ډیر څرګندونه د TNBC پراختیا لپاره د وړاندوینې نښه کونکي په توګه پیژندل شوې (چیان او نور، 2016). په هرصورت، د TNBC ودې او میټاسټاسیس د مخنیوي لپاره د CRISPR/Cas9 په کارولو سره د ROR1 خاموش کول به یوه مؤثره ستراتیژي وي.
د سیالیلیشن پروسه کې د ګلایکو کانجوګیټس ته د سیالیک اسید اضافه کول شامل دي، کوم چې د سیالیل ټرانسفیریز (STs) لخوا کتلیز کیږي. ST8SIA1 د ST کورنۍ پورې اړه لري او د مختلفو ناروغیو لکه لیمفوسایټک لیوکیمیا او کولوریکټل سرطان په رنځپوهنه کې مهم رول لوبوي (چنګ او نور، 2018). د RNA ترتیب تحلیل ښیې چې ST8SIA1 د TNBC ناروغانو د سینې نسج کې خورا څرګند شوی او په مثبت ډول د تومور سپپرسر جین p53 کې د بدلونونو سره تړاو لري، کوم چې ممکن د TNBC رنځپوهنه کې مرسته وکړي (باتولا او نور، 2017). سربیره پردې، ST8SIA1 د TNBC میټاسټاسیس او تکرار کې ښکیل دی، وړاندیز کوي چې دا د TNBC په پیښیدو او پراختیا کې مهم رول لوبوي. د TNBC په ان ویټرو ماډل کې، د CRIPSR/Cas9 لخوا د ST8SIA1 ټک کول د ودې او میټاسټاسیس مخه نیولو لپاره ښودل شوي (باتولا او نور، 2017). دا وړاندیز کوي چې CRISPR/Cas9 ممکن د TNBC په درملنه کې د ST8SIA1 آنکوجین د فعالیت مخنیوي لپاره یوه مهمه وسیله وي.
NAT1 یو میټابولیک انزایم دی چې د دوهم پړاو زینوبیوټیک مرکباتو جوړښت کتلیز کوي او تقریبا په ټولو انساني نسجونو کې څرګندیږي. NAT1 کولی شي د کوفیکٹر فولیټ څخه کار واخلي ترڅو اسیتیل-CoA (اسیتیل-CoA) په نښه کړي حتی د اروماتیک امین سبسټریټ په نشتوالي کې (سټیپ او نور، 2015؛ لوریري او نور، 2014). مطالعاتو ښودلې چې NAT1 د سینې سرطان حجرو ماډلونو کې د میټریکس میټالوپروټینیز 9 (MMP9) فعالیت تنظیموي او د ګلوکوز لوږې پرمهال د غبرګون اکسیجن ډولونو (ROS) څخه ساتنه کوي (وانګ او نور، 2018). د NAT1 حذف کول د پیروویټ ډیهایډروجنیز کمپلیکس مخنیوي لپاره ښودل شوي، چې د مایټوکونډریال اختلال لامل کیږي (وانګ ایل او نور، 2019). سربیره پردې، مختلفو نورو راپورونو ښودلې چې د کوچني مالیکولونو او siRNA خاموش کولو په کارولو سره د NAT1 مخنیوی کولی شي د سینې سرطان حجرو برید او تکثیر کم کړي (سټیپ او نور، 2018). په دې وروستیو کې، CRISPR/Cas9 د سینې سرطان حجرو لاین MDA-MB-231 کې د NAT1 د فشارولو لپاره کارول شوی و، چې د هغې د څرګندیدو کچې پورې اړه لري د حجرو میټابولیزم اغیزه کوي. دې مطالعې دا هم ښودلې چې NAT-1 د TNBC د پرمختګ او میټاسټاسیس لپاره خورا مهم دی (کارلیسل او نور، 2020).
د انکوجینونو همغږي شوي لیږد د سوپر انهانسرز، ټرانسکرپشن فکتورونو او کوفیکٹرونو لخوا تنظیم کیږي (Hnisz et al., 2015). سربیره پردې، د سایکلین پورې تړلي کایناسونو (CDKs) یوه ډله، لکه CDK7، CDK8، CDK9، CDK12، او CDK13، د ټرانسکرپشن تنظیم لپاره اړین دي. د دوی په منځ کې، CDK7 د RNA پولیمیریز II فاسفوریلیشن کې ښکیل دی، کوم چې د TNBC د رنځپوهنې کې د آنکوجین لیږد پیل او پراختیا لپاره خورا مهم دی. په یوه نیمه څیړنه کې، د CRISPR/Cas9 لخوا د CDK7 حذف کول TNBC منع کړ، دا په ګوته کوي چې د TNBC رنځپوهنه CDK7 پورې اړه لري (وانګ Y. et al., 2015).
مطالعاتو ښودلې چې په MYC او RBP (RNA binding protein) کې بدلونونه کولی شي apoptosis رامینځته کړي، پداسې حال کې چې په MYC یا RBP کې د واحد جین بدلونونه د سرطان حجرو وده اغیزه نه کوي (آینسټاین او نور، 2021). د انسان جینوم کې له 1000 څخه ډیر RBPs د CRISPR/Cas9 پر بنسټ کتابتون په کارولو سره سکرین شوي. د دوی په منځ کې، 57 RBPs د لوړ MYC کچې سره د سرطان حجرو ودې لپاره مهم وموندل شول (ویلیر او نور، 2020). سربیره پردې، YTHDF2 د TNBC حجرو ودې ساتلو لپاره مهم دی او د لوړ MYC څرګندونې سره د سرطان حجرو کې د لوړې کچې لیږد او ژباړې پرمهال د میتیلیټ شوي لیږدونو مقدار کموي. سربیره پردې، YTHDF2 د سرطان حجرو لپاره اړین ندي، کوم چې د TNBC ناروغانو د ژوندي پاتې کیدو اوږدولو لپاره د لوړ MYC کچې پورې لږ تړاو لري (آینسټاین او نور، 2021)، وړاندیز کوي چې دا ممکن د درملو لپاره احتمالي درملنې هدف وي چې کولی شي TNBC مات کړي.
د زنک ګوتو پروټینونه (ZNFs) د ټول انسان جینوم شاوخوا 1٪ جوړوي. مطالعاتو ښودلې چې ZNF کولی شي په مختلفو سرطانونو کې د حجرو تکثیر تنظیم کړي، لکه د ځيګر سرطان، د سینې سرطان او د کولوریکټل سرطان (ژانګ ډبلیو او نورو، 2021؛ لی او نورو، 2017). د CRISPR ناک آوټ لخوا رامینځته شوي کتابتونونه د سینې سرطان حجرو کې د مختلف تومور سوپریسر جینونو (TSGs) سکرین کولو لپاره کارول شوي (شالیم او نورو، 2014). له هغه وخت راهیسې، د CRISPR/Cas9 ZNF319- حذف شوي د سینې سرطان حجرو ټرانسکرپټومیک مطالعې ښودلې چې ZNF319 د تومور سوپریسر جین دی چې د سینې سرطان تکثیر کموي او له همدې امله په مختلفو احتمالي سیګنال میکانیزمونو او نورو بیولوژیکي دندو کې دخیل دی (وانګ ایل او نورو، 2022).
فیروپټوسس د پروګرام شوي حجرو د مړینې یو ډول دی چې د اوسپنې په شتون پورې اړه لري. دا معلومه ده چې د فیروپټوسس پراختیا د لیپید پیرو اکسایډونو شتون لخوا اغیزمن کیږي. سربیره پردې، د PKCβII راپور ورکړل شوی چې د لیپید پیرو اکسایډیشن لومړنی ښودنه کوي، او د لیپید پیرو اکسایډیشن زیاتوالی د فیروپټوسس سره تړاو لري. د CRISPR/Cas9-mediated kinase inhibitors کتابتون سکرین کولو څرګنده کړه چې PKCβII د لیپید پیرو اکسایډیشن په پروسه کې ښکیل دی، کوم چې د MDA-MB-231 حجرو کې د فیروپټوسس لپاره خورا مهم دی (ژانګ او نور، 2022). له همدې امله، دا وړاندیز کوي چې د CRISPR/Cas9 لخوا د PKCβII ناک آوټ کول ممکن د فیروپټوسس پورې اړوند ناروغیو درملنې لپاره د تومور د ماتولو احتمالي جین هدف وي (ژانګ او نور، 2022).
داسې انګیرل کیږي چې د مخدره توکو مقاومت د سرطان ناروغانو کې د نږدې 90٪ مړینې لپاره مسؤل دی او د سرطان درملنې کې یو له لویو ننګونو څخه دی (بوکووسکي او نور، 2020). پایلې ښیي چې د مخدره توکو جریان، د DNA ترمیم، اپوپټوسس او د حجرو د سیګنال کولو مختلفو لارو پورې اړوند کافي شمیر جینونه د مخدره توکو مقاومت سره تړاو لري (حیدر او نور، 2020). د دوی په منځ کې، ډیری جینونه د CRISPR/Cas9 وسیلو لخوا په نښه شوي او د مخدره توکو مقاومت کمولو او د سرطان ضد درملنې اغیزمنتوب زیاتولو کې یې امید لرونکې پایلې ښودلې دي (وغاري-تاباري او نور، 2022). سربیره پردې، د لوړ تروپوټ CRISPR/Cas9 جین ناک آوټ سکرینینګ کتابتونونه د احتمالي مخدره توکو مقاومت جین اهدافو فعالیت بدلولو کې ښکیل دي (شالیم او نور، 2015). د پیکلیټاکسیل مقاومت جینونو پیژندلو لپاره، د جینوم پراخه sgRNA کتابتون سکرینینګ سره یوځای د RNA ترتیب د اتو نوماند جینونو پیژندلو لپاره کارول شوی و، په شمول د هسټون ډیسیټیلیز 9 (HDAC9)، کوم چې د تکرار TNBC ناروغانو کې د مخدره توکو مقاومت سره تړاو لري (B et al., 2020). په یوه بله څیړنه کې، د TNBC ناروغانو د ژوندي پاتې کیدو په جریان کې د ډیسرین/تریونین او ټایروسین پروټین کایناز (DSTYK) زیاتوالی لیدل شوی چې د سرطان ضد درملو سره درملنه شوي. سربیره پردې، د DSTYK CRISPR/Cas9-منځګړیتوب ټکان د مخدره توکو مقاومت لرونکي سرطان حجرو اپوپټوسس د پام وړ لوړ کړ په ویټرو کې (SUM102PT حجرو او MDA-MB-468 حجرو) او د ان ویوو TNBC ماډل (Ogbu et al., 2021).
که څه هم TNBC د MAPK لارې غیر معمولي فعالول لري، د MEK په نښه شوي درملنې کلینیکي اغیزه کمزورې ده. د CRISPR/Cas9 جینومیک کتابتون سکرین څرګنده کړه چې د PSMG2 (د پروټوم اسمبلۍ چیپرون 2) مخنیوی د TNBC BT549 او MB468 حجرو ته د MEK مخنیوی کونکي AZD6244 ته حساس کوي. د PSMG2 CRISPR/Cas9 ټک کول د پروټیزوم نورمال فعالیت بدل کړ، چې د PDPK1 د آټوفیګي منځګړیتوب بې ځایه کیدو لامل شو، په دې توګه د TNBC موږک ماډلونو کې د تومور حجرو ته نور هم وده ورکړه چې د AZD6244 (MEK مخنیوی کونکي) او MG132 (پروټیزوم مخنیوی کونکي) لخوا هڅول شوي. په دې توګه، پروټیزوم او MAP کیناز (MEK) مخنیوی کونکي د تومور حجرو د تکثیر کمولو لپاره په همغږۍ سره اداره کیدی شي (وانګ ایکس. او نور، 2022).
CRISPR/Cas9 د جین د فعالیت د ضایع کیدو لپاره هم کارول شوی چې د TNBC مقاومت لامل کیږي (شو او نور، 2020). Ge او نورو په TNBC کې د JQ1، د BET بروموډومین مخنیوی کونکي (BBDI) سره د درملنې شوي سرطان حجرو د درملو مقاومت میکانیزم تشریح کړ. د CRISPR/Cas9 په کارولو سره، دوی وموندله چې د rb1 جین حذف کول د TNBC د سرطان ضد درملو JQ1 په وړاندې مقاومت رامینځته کوي. له همدې امله، د TNBC کې د JQ1 درملو په ځواب کې د rb1 فعالیت مهم دی. دوی دا هم راپور ورکړ چې پیکلیټاکسیل د CDK4/6 کایناس/مایکروټیوبول مخنیوی کونکی دی، او د BBDIs لکه JQ1 سره یې ترکیب ممکن د درملو مقاومت لرونکي TNBC ته ژمن درملنې ځوابونه چمتو کړي (Ge او نور، 2020).
د اوږد غیر کوډ شوي RNA (lncRNA) د ټرانسکرپشنل منظره په TNBC کې د نیو اډجوانټ درملنې په وړاندې د مقاومت لپاره مسؤل ګڼل شوې ده. دا څیړنه ښیي چې پنځه مختلف MALAT1 lncRNA ټرانسکرپټونه په TNBC کې خورا څرګند شوي دي. سربیره پردې، د MALAT1 CRISPR/Cas9-منځګړیتوب حذف کول د TNBC BT-549 حجرو حساسیت پیکلیټاکسیل او ډاکسوروبیسین ته زیات کړ، چې په TNBC کې د MALAT1 مقاومت لپاره احتمالي رول وړاندیز کوي (Shaath et al., 2021).
په BRCA1 (BRCA1m) کې بدلونونه متضاد دي او له همدې امله کشف کول یې ستونزمن دي. د PARP1 (poly(ADP-ribose) polymerase) په نښه کول، چې د BRCA1 مصنوعي وژونکي ملګري دي، ممکن د TNBC درملو کیمو حساسیت زیات کړي. د CRISPR/Cas9 په کارولو سره، د PARP1 حذف کول د سرطان ضد درملو لکه ډاکسوروبیسین، جیمسیټابین او ډوسیټاکسل حساسیت mBRCA1 میوټینټ TNBC حجرو ته زیات کړ، چې دا وړاندیز کوي چې PARP1 په TNBC کې د مخدره توکو مقاومت کې هم دخیل دی (Vaghari-Tabari et al., 2022). . د تومور د فشارولو جینونو BRCA1 یا BRCA2 کې بدلونونه په خلکو کې د سینې سرطان د پراختیا احتمال زیاتوي. د دې ناروغانو درملنه د PARP مخنیوی کونکو کارولو ته اړتیا لري. سربیره پردې، دا ښودل شوې چې د CRISPR/Cas9 په کارولو سره د نیوکلیوټایډ د ژغورنې فکتور DNPH1 ماتول کولی شي زهرجن نیوکلیوټایډ 5-هایډروکسی میتیلډیوکسیوریډین (hmdU) مونوفاسفیټ لرې کړي، په دې توګه د PARP مخنیوی کونکو (Fugger) ته د حساسیت په وړاندې د BRCA کمښت لرونکي حجرو غبرګون لوړوي. et al., 2021). په دې توګه، CRISPR/Cas9 او PARP1 مخنیوی کونکي ممکن د TNBC لپاره د درملنې یوه مهمه ستراتیژي شي.
د ننوتلو ګلایکوپروټین (P-gp) جین د څو درملو مقاومت لرونکی جین دی چې عموما د ټولو TNBC نږدې 41٪ کې لوړ شوی (سن او نور، 2020). د P-gp لخوا هڅول شوي درملو جریان د سینې سرطان کې د درملو مقاومت کلیدي تنظیم کونکي په توګه پیژندل شوی. د P-gp مخنیوی کونکو د سینې سرطان کې د سرطان ضد درملو ته ډیر حساسیت ښودلی دی (فامټا او نور، 2021). په دې توګه، د CRISPR/Cas9- منځګړیتوب شوي د P-gp او P-gp مخنیوی کونکو خلاصول یا فشار کول ممکن په TNBC کې د مخدره توکو مقاومت باندې بریالي کیدو لپاره خورا مهم میتودونه وي.
د ATP سره تړلی کیسټ لیږدونکی G2 (ABCG2) په TNBC کې د مخدره توکو مقاومت رامینځته کولو لپاره پیژندل شوی (Palasuberniam et al., 2015)، که څه هم اوس مهال د CRISPR/Cas9 او ABCG2 د خاموش کولو او د تومور سوپرسر جین غیر فعالولو ترمنځ د اړیکو په اړه هیڅ راپور نشته. PTEN ممکن د ABCG2 فعالولو ته وده ورکړي (Palasuberniam et al., 2015)، (Deepak Singh et al., 2021). له همدې امله، د ABCG2 لرې کولو لپاره د CRISP/Ca9 کارول او د ABCG2 مخنیوی کونکي سره یوځای کول ممکن په TNBC کې د مخدره توکو مقاومت باندې بریالي کیدو لپاره مناسب درملنه وي. جدول 2 د CRISPR/Cas9 یادونه کوي چې ټول مقاومت جینونه په نښه کوي.
جدول ۲. CRISPR/Cas9 د TNBC مقاومت مختلف جینونه په نښه کوي ترڅو حجرې د سرطان ضد درملو ته حساس کړي.
د CRISPR/Cas9 کتابتونونه د سرطان د ناروغۍ سره تړلي د جین بدلونونو د سکرین کولو لپاره احتمالي وسیلې دي (چان او نور، 2022). دا سکرینینګ طریقه څلور مرحلې لري لکه (a) د کتابتون جوړول، (b) د لینټیویرال لیږد، (c) د فینوټایپیک سکرینینګ، او (d) د هدف جین تحلیل. که څه هم TNBC د MAPK لارې غیر معمولي فعالول لري، د TNBC ناروغانو لپاره د MEK هدف شوي درملنې کلینیکي تشخیص چې د تومور سپپرسر جینونو لکه PTEN، RB1، او TP53 کې بدلونونه لري خورا ضعیف دی.
سربیره پردې، د CRISPR/Cas9 په کارولو سره د جین ناک آوټ سکرین خورا قوي او انتخابي مالیکول، ډیهایډروکاټرول، چې د ګواتیمالا ګلونو او پاڼو استخراج کې ډیر دی، ازموینه وکړه ترڅو د MDA-MB-231 باندې د ډیهایډروکاټرول اغیز پوه شي. د انتخابي حجرو سایټوټوکسیسیټي میکانیزمونه. د TNBC فرعي ډولونو میسینچیمل ډډ ځانګړتیاوې. دې CRISPR/Cas9 پر بنسټ سکرین دا هم څرګنده کړه چې HSD17B11، یو جین چې د 17β-هایډروکسیسټرایډ ډیهایډروجنیز ډول 11 کوډ کوي، په MDA-MB-231 حجرو کې په لوړه کچه څرګند شوی او د MDA-MB-231 حجرو لپاره ځانګړي ډیهایډروفالکارینول پایله لري (ګرانټ او نور، 2020). په دې توګه، دا وړاندیز کوي چې د CRISPR/Cas9 جینومیک سکرینینګ د احتمالي طبیعي مرکباتو د سرطان ضد ملکیتونو لاندې میکانیزمونو پیژندلو کې لوی ظرفیت لري.
برسېره پردې، د سرطان په وړاندې د TNBC زیانمنتیا د جینوم پراخه ان ویوو CRISPR/Cas9 سکرین په کارولو سره مطالعه شوه، کوم چې د آنکوجینک او تومور سپپرسر لارو ترمنځ اړیکه ښودلې. د mTOR او هیپو لارو کلیدي برخې راپور شوي چې په TNBC کې د تومور تنظیم کې مهم رول لوبوي. سربیره پردې، مطالعاتو ښودلې چې د mTORC1/2 او YAP آنکوپروټین فارماسولوژیکي مخنیوی په مؤثره توګه د ان ویټرو درملو-میټریکس ترکیب ماډل او ان ویوو ناروغ څخه اخیستل شوي زینوګرافټونو په کارولو سره د TNBC رنځجنیت مخه نیسي. سربیره پردې، د تورین-1-منځګړیتوب mTORC1/2 مخنیوی میکروپینوسایټوسس زیاتوي، پداسې حال کې چې د ورټیپورفین لخوا هڅول شوی YAP مخنیوی د TNBC حجرو مړینې لامل کیږي. په ګډه سره، دا پایلې د TNBC لپاره د نوي او مؤثره درملنې پیژندلو لپاره د جینوم پراخه ان ویوو CRISPR سکرینینګ ځواک او قوي والی روښانه کوي (ډای او نور، 2021).
د معافیت سیسټم بې نظمي د تومورجنیسس کې یو مهم فاکتور دی. د سرطان حجرې د دفاعي میکانیزمونو له لارې د معافیت پاکولو څخه ډډه کوي، په شمول د تومور مایکرو چاپیریال کې د معافیت حجرو فعالیت سره مداخله کول او د معافیت سیسټم سره جوړجاړی کول. له همدې امله، د ښه معافیت سیسټم رامینځته کول ممکن د تومورونو سره د مبارزې لپاره یوه کلیدي لاره وي. د CRISPR/Cas9 پر بنسټ د جین تعدیل کارول د معافیت د خرابوالي پورې اړوند ډیری مسلو ته د مختلفو لیدونو څخه رسیدګي کوي. CRISPR/Cas9 د لاندې لارو له لارې د سینې سرطان په وړاندې د تومور ضد معافیت ښه کولو لپاره کارول شوی (شکل 3).
شکل ۳. د CRISPR/Cas9 معافیتي درملنه د TNBC حجرو په نښه کوي. د CDK5 ضایع کول او د PDL1 او CD155 ماتول د معافیت سیسټم لوړوي. په ورته ډول، د A2AR ضایع کول او د TAAs لکه HER2، mucin 1 او TEM8 ماتول د سرطان حجرو په وژلو کې د CAR-T حجرو موثریت زیات کړی. د CRISPR/Cas9 لخوا پرمخ وړل شوي T حجرو سکرینینګ ښودلې چې د p38 kinase ګډوډي د T حجرو ضد تومور فعالیت زیاتوي. د CRISPR/Cas9 لخوا تعدیل شوي T حجرې د TCR (T حجرو ریسیپټر) څرګندونه زیاتوي، چې په پایله کې د T حجرو ضد تومور فعالیت لري.
د معافیت درملنې هدف د سرطان حجرو باندې د برید لپاره د معافیت سیسټم هڅول دي. د معافیت چیک پواینټ پروټینونو ډیر څرګندیدل معمولا د اتوماتیک عکس العملونو مخه نیسي مګر ممکن د سرطان څخه مخنیوي کې مرسته وکړي (ټوپالین او نور، 2015). دا پروټینونه د معافیت حجرو په سطحه د ریسیپټرونو سره تړلو سره د معافیت عکس العملونو مخه نیسي. ډیری چیک پواینټ پروټینونه (لکه CD155 او PD-L1) د معافیت حجرو کې د PD-1 ریسیپټر په نښه کوي او د سینې سرطان کې څرګندیږي، په ځانګړي توګه TNBC (Li Y.-C. او نور، 2020). د CRISPR/Cas9 په کارولو سره د PD-L1 یا د هغې ریسیپټر ماتول کولی شي د معافیت سیسټم هڅوي چې د TNBC تومورونو برید وکړي (Yahata او نور، 2019). سربیره پردې، د CDK5 د CRISPR/Cas9-منځګړیتوب حذف کولو له لارې د PD-L1 څرګندونه کمول ښودل شوي چې په ویټرو او ان ویوو کې د تومور وده مخنیوی کوي (ډینګ او نور، 2020). د سینې سرطان په ان ویټرو او ان ویوو ماډلونو کې د ودې مخنیوی وړاندیز کوي چې د CD155 د shRNA منځګړیتوب کمول ممکن د سینې سرطان باندې د درملنې اغیز ولري (ګاو او نور، 2018).
د CAR T حجرې CARs څرګندوي چې د تومور سره تړلي انټيجنونه (TAAs) پیژني او کولی شي د دوی فعالیت لوړولو لپاره د چیک پواینټ پروټینونو د ټکولو څخه کار واخلي (لی سي او نور، ۲۰۲۰). د سینې سرطان کې د CAR T حجرو درملنې لپاره مختلف احتمالي اهداف شتون لري، پشمول د څو TAAs لکه HER2، mucin1، او TEM8 (باجین او نور، ۲۰۱۸). داسې شواهد شتون لري چې د CAR T حجرې چې میسوتیلین په نښه کوي (په TNBC BT-459 حجرو کې ډیر څرګند شوي) د سرطان په وړاندې ډیر اغیزمن دي کله چې PD-1 د CRISPR/Cas9 په کارولو سره له مینځه یوړل شي (هو او نور، ۲۰۱۹). په هرصورت، د ناروغانو څخه د T حجرو جلا کول او بیا یې د ex vivo ترمیم کول د کار او وخت مصرف پروسه ده. که څه هم نړیوال T حجرې کولی شي د جلا کولو اړتیاوې کمې کړي، د ډونر T حجرې چې د انسان لیوکوسایټ انټيجن (HLA) ټولګي I او د T حجرو ریسیپټر (TCR) څرګندوي باید لرې شي ترڅو د ګرافټ-مقابلې-کوربه غیر معمولي حالتونو مخه ونیسي (رین او نور، ۲۰۱۷). ، 2017a). د CRISPR/Cas9 په کارولو سره، HDR کولی شي په ورته وخت کې TCR او HLA له منځه یوسي او د CAR کوډ کولو جین له منځه یوسي. مطالعاتو ښودلې چې CRISPR/Cas9 د TCR ځای ته د CD19 ضد CARs معرفي کولو لپاره کارول کیدی شي، په دې توګه د T حجرو له کمولو پرته په مؤثره توګه CARs تولیدوي (Dimitri et al., 2022). ملټي پلیکس ټیکنالوژي رامینځته شوې ترڅو د TCR، بیټا-2-مایکروګلوبولین (B2M)، HLA-I سبونیټ او نورو پروټینونو لکه PD-1 او CTLA-4 له مینځه وړلو سره د الوجینیک CAR T حجرو تولید کړي، کوم چې ممکن د TNBC په وړاندې ډیر د سرطان ضد ځانګړتیاوې ولري (Eyquem et al., 2017; Liu et al., 2017; Ren et al., 2017b; Dimitri et al., 2022).
د CRISPR/Cas9 کارول کولی شي د CAR-T حجرو اغیزمنتوب ښه کړي. اډینوسین د معافیت ضد ملکیتونو لرونکي پیژندل کیږي او کولی شي د T حجرو فعالیت بندولو او د اډینوسین A2A ریسیپټرونو (A2AR) فعالولو سره د سرطان ضد معافیت کم کړي (ویګانو او نورو، 2019). د CRISPR/Cas9 په کارولو سره د A2AR خاموش کول په ویوو کې د CAR-T حجرو اغیزمنتوب د پام وړ ښه کړی (ګیوفریډا او نورو، 2021). د T حجرې د مختلفو فینوټایپیک ځانګړتیاو ښودلو لپاره پیژندل شوي لکه د حجرو پراختیا، توپیر، اکسیډیټیو فشار او جینومیک فشار. د CRISPR/Cas9 پر بنسټ د T حجرو سکرینینګ د 25 مختلف T حجرو ریسیپټر کایناسونو ګډوډي څرګنده کړه. د دوی په منځ کې، د p38 کایناس حذف کول د T حجرو د تومور ضد فعالیت لوړولو لپاره ښودل شوي، دا په ګوته کوي چې p38 کایناس د CAR-T حجرو تنظیم کولو کلیدي تنظیم کونکی دی (ګوروسامي او نورو، 2020).
د T حجرات د CRISPR/Cas9 په کارولو سره په جینیاتي ډول تعدیل کیدی شي ترڅو لوړ څرګند شوي TCRs تولید کړي. ناروغانو ته د جینیاتي پلوه تعدیل شوي T حجرو لیږدول د endogenous T حجرو په پرتله قوي د سرطان ضد فعالیت ښودلی دی. له همدې امله، endogenous TCRs ممکن په ناروغانو کې د جینیاتي پلوه بدل شوي TCRs سره سیالي وکړي، کوم چې ممکن د سرطان معافیت درملنې وړتیا اغیزه وکړي. د دې ستونزې د لرې کولو لپاره، د CRISPR/Cas9 کارول د ترلاسه کونکي حجرو کې endogenous TCR-β لرې کول او وروسته د سرطان ناروغانو ته د TCR-β T حجرو لیږدول ممکن د endogenous TCR جنسي سیالۍ ته اړتیا پرته د سرطان ضد معافیت غبرګونونه وښيي (فین او نور 2018). په دې توګه، د CRISPR-تعدیل شوي T حجرو استثنا سره، TCRs د نورمال TCR-ترانسپورت شوي T حجرو په پرتله د تومور انټيجنونو ته زر ځله ډیر حساس دي. سربیره پردې، په مختلفو لیوکیمیا کې، د γδ TCR+ CRISPR لخوا تولید شوي بدل شوي T حجرات د معیاري TCR لیږد په پرتله د CD4+ او CD8+ T حجرو لوړ څرګندونه ښیې (لیګوت او نور، 2018). په دې توګه، د CRISPR/Cas9 لخوا تولید شوي تعدیل شوي T حجرات ممکن د TNBC د له منځه وړلو لپاره د معافیت درملنې مؤثره طریقه وي.
انټیګرینونه د حجرو چپکونکي مالیکولونه دي چې د حجرو ټرانس میمبرینونو کې شتون لري او د حجرو د بهر حجروي میټریکس (ECM) سره تړل هڅوي (حمیدي او ایواسکا، ۲۰۱۸). د انټیګرینونو بې نظمي د سرطان پراختیا او مهاجرت سره تړاو لري د خارج حجروي میټریکس بدلولو سره، چې په دوران کې د سرطان حجرو بقا لامل کیږي (حمیدي او ایواسکا، ۲۰۱۸). CRISPR/Cas9- منځګړیتوب انټیګرین ناک ډاون په TNBC کې د تومور پرمختګ، میټاسټاسیس، او استعمار ورو کوي. د انټیګرین a5 (ITGA5) ناک ډاون راپور شوی چې د حجرو مهاجرت او پرمختګ په نورو سرطانونو لکه د سږو سرطان کې کموي (Ju et al.، ۲۰۱۷)، وړاندیز کوي چې انټیګرین a5 ممکن د TNBC د رنځجنیسس کې هم یو مهم فاکتور وي.
د دودیزو جنیني سټیم (ES) حجرو میتودونو په کارولو سره د ناک آوټ موږکانو تولید کول یو سخت کار، وخت نیسي، او غیر موثر پروسه ده. د هوموګلوس بیا ترکیب له لارې د ES حجرو په نښه کولو لپاره میاشتې او کلونه وخت نیسي، د کیمیریک موږکانو نسل ورکوي، او بیا د هوموزایګس اولاد تولید لپاره د هیټروزایګس موږکانو سره یې تیریږي. د ډیری جینیاتي بدلونونو سره د موږکانو رامینځته کولو لپاره پیچلي کراس نسل ته اړتیا ده. په هرصورت، ډیری ستونزې رامینځته شوي کله چې د CRISPR/Cas9 په کارولو سره د ES حجرو د خلاصولو یا د CRISPR/Cas9 اجزاو مایکرو انجیکشن کولو سره د واحد حجرو القاح شوي هګیو ته رامینځته شوي موږکانو کارول. د مثال په توګه، د بدلونونو معرفي کول ډیری وختونه په بایلیک ځای کې پیښیږي او د جین ځانګړي ندي. پدې وروستیو کې راپور ورکړل شوی چې د CRISPR/Cas9 ټیکنالوژۍ کارولو سره ES حجرې کولی شي په ورته وخت کې تر 5 جینونو کې بایلیک بدلونونه داخل کړي (نیشیزونو او نورو، 2021). د دې هدف لپاره، Cas9 mRNA او پنځه جین ځانګړي gRNAs په ورته وخت کې د ES حجرو ته لیږدول شوي. دا د دې پروسې ژمنې او اغیزمنتوب روښانه کوي، که څه هم دا بدلونونه ممکن هغه وخت انتقال شوي وي کله چې د بنسټ ایښودونکو لیکو نسل ورکول کیده ترڅو د کوینټوپل ناک آوټ موږکانو تولید کړي. څیړنه د یوې حیرانونکې موندنې راپور هم ورکوي: د ES حجرو نور د جینیاتي پلوه تعدیل شوي موږکانو رامینځته کولو ته اړتیا نلري. پرځای یې، د ځانګړو جین محصولاتو لرې کولو لپاره، Cas9 mRNA او gRNA د واحد حجرو مرحلې جنینونو کې داخل شوي. په پایله کې، د ناک آوټ بنسټ ایښودونکو لیکې رامینځته شوي چې په تیوري کې په موږکانو کې د جین حذف کولو پایلو مطالعې لپاره کارول کیدی شي (Qin et al., 2016). پدې توګه، CRISPR/Cas9 د دودیز جینیاتي انجینرۍ په پرتله په ټیټ لګښت کې د TNBC درملنې لپاره د ټرانسجینک موږکانو رامینځته کولو ته اجازه ورکوي. د CRISPR/Cas سیسټم په کارولو سره، د ناک آوټ موږک یو نوی ماډل رامینځته شوی چې کولی شي په TNBC کې په یو یا ډیرو داخلي جینونو کې د نقطې بدلونونه په بریالیتوب سره معرفي کړي. د دې مفکورې پراساس، د TNBC څارویو ماډلونه د BRCA1 او p53 د CRISPR/Cas9-منځګړیتوب حذف کولو په کارولو سره هم رامینځته کیدی شي، چې پایله یې د HR ترمیم، جینومیک بې ثباتي، او د بدلون فینوټایپونو له لاسه ورکول دي (Annunziato et al., 2020).
اوس مهال، د TNBC تشخیص لپاره مختلف میتودونه لکه میموګرافي، مقناطیسي ریزونانس امیجنگ (MRI) او الټراساؤنډ کارول کیږي. په هرصورت، دا میتودونه ځینې محدودیتونه لري. میموګرافي د میټاسټاسونو پرځای د سینې د محلي نسج تشخیص لپاره کارول کیږي، چیرې چې د سرطان حجرې نورو ارګانونو ته لیږدول شوي دي. الټراساؤنډ د TNBC تشخیص لپاره د باور وړ میتود ندی (چن او لی-فیلکر، 2023). MRI د الټراساؤنډ او میموګرافي په پرتله لوړ حساسیت لري، مګر د هغې تشخیصي دقت محدود دی (شا او چن، 2022). د نسج بایپسي د سرطان حجرو پیژندلو لپاره یوه برید کوونکې لاره ده. په هرصورت، په ځینو مواردو کې، بایپسي ممکن د سرطان نسج له لاسه ورکړي که چیرې ستنه د علاقې له ساحې څخه لرې شي. سربیره پردې، دا خورا ګران دی او د ناروغ لپاره دردناک کیدی شي. TNBC د سرطان یو متفاوت ډول دی، نو بایپسي ممکن د سرطان ډول په اړه کافي معلومات چمتو نکړي. له همدې امله، د TNBC کشف کولو لپاره د تشخیص له پلوه د باور وړ نوې میتود ته په بیړني ډول اړتیا ده. CRISPR/Cas9 ممکن د سینې د سرطان تشخیص لپاره د خورا حساس او لږترلږه برید کونکي بدیل په توګه کار وکړي. د دې لپاره، د TNBC تشخیص لپاره د PCR میتودونو ښه کولو لپاره د CRISPR/Cas9 پر بنسټ ستراتیژیانې کارول کیدی شي. لومړی، د CRISPR سیسټم Cas9 او cpf1 پروټینونه د غیر مشخص DNA لرې کولو لپاره کارول کیږي، او بیا دا دوه پروټینونه (Cas9 او cpf1) کولی شي د هدف DNA سره تړلو دمخه د PAM ترتیب وپیژني (دیپک سینګ او نور، 2021). . پدې توګه، PCR کولی شي د سرطان پراختیا سره تړلي بدلونونه وپیژني. ډیری مطالعاتو دا CRISPR پر بنسټ ستراتیژي غوره کړې ترڅو په مختلفو سرطانونو کې مختلف بدلونونه کشف کړي (سفاري او نور، 2019). پدې توګه، د CRISPR پر بنسټ PCR میتودونه ممکن د TNBC تشخیص انحصار د بایوپسي پر بنسټ امیونوهیسټو کیمیا په څیر د برید کونکي میتودونو پورې کم کړي.
په TNBC کې د هورمون ریسیپټر تنظیم کې جینوټائپیک بدلونونه هم ښودل شوي دي (چن او روسو، ۲۰۰۹). د پاملرنې د نقطې تشخیص لپاره د مایکرو اریونو په کارولو سره د CRISPR/Cas9 پر بنسټ PCR ستراتیژۍ کولی شي دا بدلونونه په مؤثره توګه وڅاري (حاجیان او نور، ۲۰۱۹). دا کولی شي د روغتیا پاملرنې چمتو کونکو ته د TNBC ناروغانو کې د ځانګړو بدلونونو په اړه اړونده معلومات هم چمتو کړي، کوم چې کولی شي د دوی د درملنې کورس ښه کولو کې مرسته وکړي. په هرصورت، دا ګډ تخنیک محدودیتونه لري. له همدې امله، د TNBC تشخیص لپاره د روغتیا پاملرنې کې د دې CRISPR/Cas-PCR میتود کارولو دمخه پراخه څیړنې هڅو ته اړتیا ده (یانګ او نور، ۲۰۱۹).
د پوسټ وخت: د اکتوبر-۱۴-۲۰۲۴